青霉素和庆大霉素不可以一起注射，但口服用药时可以一起使用，具体药物的使用需要在专科医生指导下进行。
青霉素与庆大霉素属于不同品类的两种抗生素，药物之间一般不会发生相互作用，也不会降低药效，在致病菌尚未明确的时候同时服用，可以起到更好的抗菌效果，对促进病情恢复有积极作用。
青霉素属于β-内酰胺类的抗生素，主要是针对革兰阳性球菌，治疗各种敏感细菌所引起的感染，比如猩红热、急性扁桃体炎等。庆大霉素属于氨基糖苷类的抗生素，主要是针对革兰阴性杆菌，常用于呼吸道感染、腹膜炎、胆囊炎等疾病。在完善相关检查，明确此病菌类型后，可以针对性选择其中一个适宜抗生素进行治疗，也可以起到较好效果。
需要注意的是，注射液剂型的青霉素和庆大霉素如果合用，可能会发生化学反应，降低药物效果，不能达到预期治疗目的，甚至会加重病情。